### 产品及特点

本产品是根据探针法荧光定量PCR原理开发的检测试剂盒，具有以下特点：

1. **即开即用**：用户只需提供样品DNA模板，即可进行检测。

2. **高灵敏度**：经过优化的引物等组分，确保了试剂盒的灵敏度。

3. **阳性对照提供**：附带阳性对照，以便于区分假阴性样品。

4. **高特异性**：引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列中的高度保守区，避免与其他生物样本的DNA发生交叉反应。

5. **多功能检测**：既可用于定性检测，也可进行定量检测，在定量时线性范围至少为5个数量级。

6. **足够的量**：本产品可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。

7. **科研专用**：本产品仅适用于科研使用。

### 方法步骤

#### 一、DNA提取（样本制备区）

采用自选方法提取并纯化样品DNA，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

#### 二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

为了有效避免样品或本试剂盒其他成分的污染，以下稀释操作需在独立区域进行：

1. 标记6个离心管，分别编号为7，6，5，4，3，2。

2. 向每个管中加入45μL DEPC-H2O。

3. 在7号管中加入5μL浓度为1×10⁸拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10⁷拷贝/μL的标准曲线样品，放置于冰上待用。

4. 更换枪头，在6号管中加入5μL 1×10⁷拷贝/μL的阳性对照，震荡1分钟，得到1×10⁶拷贝/μL的标准曲线样品，放置于冰上待用。

5. 按相同方法在5号管中制作标准曲线，持续进行到6个稀释度的标准样品完成，放置于冰上待用。

6. 如不需制作标准曲线，阳性对照可稀释至1×10⁵拷贝/μL。

#### 三、试剂配制（试剂准备区）

如有N个待检样品，准备N+2个qPCR管（包含1个阴性对照和6个阳性对照），将以下成分加入各PCR管中（详细成分见说明书，可向我司索取），然后转移至样本准备区。

#### 四、添加模板（模板添加区）

向每个qPCR管中加入2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板、婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

#### 五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管放置于PCR扩增仪器中进行扩增，扩增程序详见说明书。

#### 六、结果分析

1. 如制作标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，从中推算待测样品DNA浓度的log值。

2. 如未制作标准曲线，则依据以下标准判定结果：阳性对照如果Ct值<30，且呈现明显的指数增长和典型的S型曲线；阴性对照Ct值为38或无Ct值，无明显的指数增长和平台期；样本检测结果如果Ct值<35，表明样品中检测到婴儿利什曼虫，结果为阳性；Ct值在35-38之间应进行复检，若重复实验结果仍在此范围且有明显指数增长，则判定为阳性，否则为阴性。

### 运输及保存

该产品须低温运输，保存于-20℃，有效期限为一年。阳性对照需单独放置，避免污染其他试剂。

本检测试剂盒采用了尊龙凯时品牌理念，旨在为生物医疗领域提供高质量的产品和服务，确保科研工作顺利进行。