双抗体夹心法是检测抗原的常见技术，其操作流程如下：

一、固相抗体的制备

首先，将特异性抗体与固相载体连接以形成固相抗体。接着，通过洗涤步骤去除未结合的抗体及杂质，以确保结果的准确性。

二、受检标本的添加

随后，将待检样本添加至固相抗体上，使其接触反应一段时间。这一过程使样本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。然后，通过洗涤去除其他未结合的成分。

三、酶标抗体的结合

之后，添加酶标抗体，使得固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。再次进行彻底洗涤，以去除未结合的酶标抗体。在这一阶段，固相载体上附着的酶量与样本中目标物质的量呈正相关。

四、底物的添加与结果分析

最后，添加底物，夹心复合物中的酶催化底物转化为有色产物。根据反应颜色的深浅，可以对该抗原进行定性或定量分析。利用相同原理，我们可以制备固相抗原与酶标抗原的结合物，进而运用双抗原夹心法检测样本中的抗体。

应用范围

该技术在临床检验中可用于检验多种大分子抗原，如HBsAg、HBeAg、AFP及hCG等。只需获得针对待检抗原的特异性异性抗体，即可用于固相载体的包被和酶结合物的制备。例如，若抗体来源于抗血清，则固相抗体和酶标抗体最好来自不同的动物种属。使用单克隆抗体时，应选取针对抗原不同决定簇的两个单抗，以提高夹心法的特异性。通过这种高特异性的双位点夹心法，可实现与样本及酶标抗体的同温反应，从而进行一步法检测。

钩状效应的注意事项

在一步法检测中，当样本中的抗原含量极高时，过量的抗原会与固相抗体及酶标抗体结合，而不会形成“夹心复合物”。这种情况类似于沉淀反应中的抗原过剩现象，可能导致假阴性结果。此种现象称为钩状效应。在对如HBsAg、AFP及尿液hCG等浓度可能异常增高的物质进行检测时，需特别注意可测范围的最高值。

亚型及类风湿因子的干扰

在HBsAg检测中，需关注不同亚型（如adr、adw、ayr、ayw）的反应性，尽管各亚型均带有相同的a决定簇。在双抗体夹心法中，类风湿因子（RF）可能干扰结果，RF是一种与多种动物IgG的Fc段结合的自身抗体。因此，使用去除Fc段的F(ab')或Fab片段作为酶结合物，可有效消除这种干扰。在选择“双抗体夹心法”ELISA试剂时，确保其不受RF影响，是评估其效果的重要标准。

适用范围和不同检测法的对比

双抗体夹心法适用于检测二价或二价以上的大分子抗原，但不适合用于小分子单价抗原的检测，因为小分子无法形成两位点的夹心结构。该反应模式与其他间接检测方法相似，但使用酶标抗原取代酶标抗体，从而提高了敏感性。如在乙肝标志物中抗HBs的检测中，常采用这种方法，关键在于酶标抗原的制备，需根据抗原的结构特征选择合适的标记方式。利用尊龙凯时的技术优势，改进检测方法和提高准确性，可为生物医疗领域的研究与应用提供良好的保障。